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與常規(guī)毫秒級(jí)碰撞誘導(dǎo)質(zhì)譜解離（CID）相比，5ns單脈沖193nm紫外激光解離（UVPD）可直接激發(fā)非變性蛋白質(zhì)骨架共價(jià)鍵至高能態(tài)引發(fā)高效解離，激發(fā)解離速率提升6個(gè)數(shù)量級(jí)，位點(diǎn)解離效率和碎片離子產(chǎn)率與其局部非共價(jià)作用和微觀結(jié)構(gòu)密切相關(guān)，通過(guò)碎片離子和解離產(chǎn)率分析可同時(shí)獲得蛋白質(zhì)序列和結(jié)構(gòu)信息。目前，193nm紫外激光解離質(zhì)譜尚未商品化設(shè)備，僅在少數(shù)實(shí)驗(yàn)室有自主搭建設(shè)備。

免疫共受體CD28是癌癥免疫治療的重要靶點(diǎn)，其胞質(zhì)端酪氨酸磷酸化激活引起的下游蛋白識(shí)別結(jié)合機(jī)制尚不清楚。本工作中，研究人員采用光親和質(zhì)譜法發(fā)現(xiàn)CD28磷酸化胞質(zhì)端與激酶PKCθ的C2結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合；利用193nm紫外激光解離質(zhì)譜對(duì)C2結(jié)合前后進(jìn)行了全序列覆蓋位點(diǎn)光解離效率的差異分析，發(fā)現(xiàn)了光解離效率顯著下降的三個(gè)關(guān)鍵結(jié)合區(qū)域和核心識(shí)別位點(diǎn)K49、H63、R68；證明了高能紫外激光解離策略在蛋白質(zhì)動(dòng)態(tài)識(shí)別結(jié)構(gòu)變化分析中的高靈敏度和單位點(diǎn)分辨高精度優(yōu)勢(shì)。

中科院大連化物所王方軍和肖春雷研究員通過(guò)交叉學(xué)科聯(lián)合攻關(guān)，在大連相干光源搭建了193nm紫外激光解離-高分辨質(zhì)譜裝置，在前期工作中通過(guò)高能光子對(duì)多肽分子的高效激發(fā)解離實(shí)現(xiàn)了多磷酸化肽修飾位點(diǎn)精確定位（Chin. Chem. Lett.，2018）和蛋白質(zhì)組學(xué)規(guī)?；蛄需b定（Anal. Chim. Acta.，2021）。

文章鏈接：https://doi.org/10.1016/j.chembiol.2022.01.005

參考資料：http://www.dicp.cas.cn/xwdt/kyjz/202207/t20220711_6475056.html